血小板聚集，真的是检验科无法破解的密码吗？
2020-04-16 14:12 文章来源：
作者：包叶江
上海瑞金医院的郭平老师在《瑞金血液》自媒体上也报道了BC-6800Plus血液分析仪的光学血小板(PLT-O)对聚集血小板的“自解聚” 功能［12］（CDR为BC-6800Plus 血液分析仪上进行的PLT-O检测）：
而30例无血小板聚集的正常对照样本的PLT-O结果与PLT-I结果无显著差异，见下图：
设置复检规则“当仪器提示‘聚集血小板’报警并且血小板结果＜100×109/L时，自动开启网织红细胞通道（CDR）复检PLT-O”并进行血涂片镜检，可解决90%以上EDTA依赖性血小板聚集导致的血小板计数假性减低的难题。对于极个别PLT-O“自解聚”不佳的血小板聚集标本（很可能标本放置时间太长或存在凝块），通知患者进行更换抗凝剂二次采血检测。此流程可显著降低重新抽血的几率，并杜绝了由于血小板聚集导致错发报告的可能性，简化血小板聚集样本的复检流程，明显提升患者满意度，并降低了医疗风险。
单位：中国科学院大学附属肿瘤医院检验科（浙江省肿瘤医院检验科）
血小板聚集会导致血小板计数假性减少，处理不当容易造成临床误诊。EDTA依赖性血小板聚集（EDTA-PTCP）被研究得较多，其发生率约为0.07%-0.21%［1］。此外，由于抽血不当引起的血小板聚集也时有发生［2］。对于血小板聚集标本的处理流程如何？是否有自动化的解决方案？本文将对以上问题进行重点探讨。
01血小板聚集样本的常见处理流程
血液样本检测时触发血细胞分析仪的“血小板聚集”或“血小板降低”报警［3-4］，先推片染色后确认是否有血小板聚集存在：若血小板聚集在镜下真实存在，可联系患者采血后立即检测或更换抗凝剂（如枸椽酸钠）后检测并对结果进行抗凝剂体积校正［5］，若二次采血重测结果确认无血小板聚集，以二次采血重测结果为准发送报告。也有采用末梢血预稀释法进行二次采血检测［6］：吸取末梢血20μL添加到0.38 mL草酸铵稀释液中，混匀后冲入计数池静置15 min，显微镜下计数3次报告均值结果。
以上的处理流程均需要二次采血，操作不便，而且受患者依从性的影响。除了二次采血外，还有一些对聚集血小板的体外“解聚”方法，如在抽血后30min内加入阿米卡星（一种抗生素）有助于纠正EDTA依赖性血小板聚集的假性PLT降低［7］；此外也有研究表明，上机检测前对标本进行预热［8］或者震荡［9］，可纠正部分血小板聚集导致的的假性PLT降低。
02光学血小板（PLT-O）对聚集血小板的“自解聚”现象的案例报道
2019年我们团队首次在自媒体上报道迈瑞BC-6800血液分析仪网织红通道的光学血小板(PLT-O)可自动纠正血小板聚集导致的PLT假性减低。据厂家研发人员介绍，该仪器的RET通道对聚集血小板的“解聚”机制包括机内恒温预热、化学解聚剂和机内高速涡旋混匀。因为是机内自动进行“解聚”，所以简称“自解聚”［10］：
随后广州中山大学附属第一医院的邓间开老师在自媒体上也报道了BC-6800 Plus血液分析仪的光学血小板(PLT-O)对聚集血小板的“自解聚” 功能［11］：
上海瑞金医院的郭平老师在《瑞金血液》自媒体上也报道了BC-6800Plus血液分析仪的光学血小板(PLT-O)对聚集血小板的“自解聚” 功能［12］（CDR为BC-6800Plus 血液分析仪上进行的PLT-O检测）：
03光学血小板（PLT-O）对聚集血小板的“自解聚”功能分析
为验证BC-6800光学血小板的“自解聚”功能，我们收集了30例正常对照和23例EDTA依赖性血小板聚集患者的外周血标本，其中23例血小板聚集标本均进行二次采血（更换为枸橼酸钠抗凝），且二次采血检测时均未出现“聚集血小板”报警，镜检无血小板聚集。本文中23例血小板聚集标本的血小板真实值均按二次采血检测的结果计算，相关学术论文已发表［13］，简要总结如下：
23例血小板聚集样本首次检测时BC-6800血液分析仪都提示“聚集血小板”报警，显微镜镜下均可见聚集的血小板，但PLT-O结果即PLT-O（EDTA）显著高于PLT-I（EDTA），与患者二次采血的PLT真实值即PLT-I（Citrate）接近，见下图：
而30例无血小板聚集的正常对照样本的PLT-O结果与PLT-I结果无显著差异，见下图：
且PLT-O散点图上也无红细胞碎片、白细胞碎片等物质的干扰，证明PLT-O对EDTA依赖性血小板聚集有“自解聚”作用。我们引入“解聚率”的概念定量这种“自解聚”作用，定义解聚率=血小板聚集标本PLT-O值/PLT真实值*100%，发现23例血小板聚集样本中有22例样本的解聚率大于80%，平均解聚率为93%。
04光学血小板（PLT-O） “自解聚”功能的应用
鉴于BC-6800光学血小板对EDTA依赖性血小板聚集的“自解聚”功能，通过与临床科室关于PLT医学决定水平的讨论，我们重新设定复检规则和复检操作流程，从而降低血小板聚集导致假性血小板降低检验报告发生的几率并简化后续操作流程，对于样本存在血小板聚集，但PLT-O复检结果在正常参考范围内的结果，经血涂片镜检确认后报告PLT-O结果。
设置复检规则“当仪器提示‘聚集血小板’报警并且血小板结果＜100×109/L时，自动开启网织红细胞通道（CDR）复检PLT-O”并进行血涂片镜检，可解决90%以上EDTA依赖性血小板聚集导致的血小板计数假性减低的难题。对于极个别PLT-O“自解聚”不佳的血小板聚集标本（很可能标本放置时间太长或存在凝块），通知患者进行更换抗凝剂二次采血检测。此流程可显著降低重新抽血的几率，并杜绝了由于血小板聚集导致错发报告的可能性，简化血小板聚集样本的复检流程，明显提升患者满意度，并降低了医疗风险。
【参考文献】
[1] 周小棉,邹晓. 假性血小板减少症研究进展[J].中华检验医学杂志,2007, 30(9):1065-1068.
[2] 邝妙欢, 陆霄云, 钟义富, 等. 假性血小板减少的相关因素[J].中山大学学报（医学科学版）, 2009, 30(s2):121-124.
[3] 陈莹莹, 吕春兰, 黄晶晶, 等. 迈瑞BC-6800血细胞分析仪血小板聚集报警信息的分析及可靠性评价[J]. 医学信息, 2017, 30(1): 269-270.
[4] 曹科, 罗小娟, 李世兴, 等. Sysmex XN-3000全自动血细胞分析流水线血小板聚集报警信息的可信性分析[J]. 山东医药, 2017(08):97-99.
[5] 王炜, 陈卫民, 倪士刚. EDTA依赖性血小板聚集对血小板计数的影响及处理方法探讨[J]. 国际检验医学杂志, 2015(22).
[6] 曹锦梅, 王兵. EDTA依赖性假性血小板减少原因分析及纠正方法[J]. 海南医学, 2016, 27(11):1881-1882.
[7] Sakurai S, Shiojima I , Tanigawa T , et al. Aminoglycosides prevent and dissociate theaggregation of platelets in patients with EDTA-dependentpseudothrombocytopenia[J]. British Journal of Haematology, 1998, 99(4):817-823.
[8] Williams TL, Archer J. Effect of prewarming EDTA blood samples to 37°C on platelet countmeasured by Sysmex XT‐2000iV in dogs, cats, and horses[J]. Veterinary Clinical Pathology,2015, 45(3):444-449
[9] Gulati G L , Asselta A , Chen C . Using a Vortex To Disaggregate PlateletClumps[J]. Laboratory Medicine, 1997, 28(10):665-667.
[10] https://mp.weixin.qq.com/s/4jWQglTdf8pvUIoeg8rgUA
[11] https://mp.weixin.qq.com/s/FBqfHAp6PBpA9zxB3XLpXw[12] https://mp.weixin.qq.com/s/CRooJcDQIZZBZ-VkRmI97g
[13] Yejiang Bao, Jia Wang, Anjun Wang, et al.Correction of spurious low platelet counts by optical fluorescence plateletcounting of BC-6800 hematology analyzer in EDTA-dependent pseudothrombocytopenia patients. Transl Cancer Res 2020;9(1):166-172