随着肿瘤靶向治疗的发展，样本早已不仅仅局限于石蜡包埋组织标本，血液标本因其获取的简便性逐渐占据越来越重要的地位，近年来对血液检测的认知及应用也在不断加深，那么在2020年疫情的特殊情况下，我们如何来运用血液来进行EGFR的快速诊断呢？

为此，我们特别采访了广州医科大学附属第一医院徐韫健教授，与大家共同探讨在疫情下如何快速检测血液EGFR？

当初为什么会选择血液诊断EGFR？

徐教授：我们实验室是2015年开展血液EGFR检测的。近几年在我国肺癌的发病率逐年上升，已经成为恶性肿瘤中致死率最高的癌症。然而临床中大部分肺癌患者就诊时已经是晚期，难以通过手术和放化疗进行根治性治疗。

随着肿瘤分子生物学的发展，靶向治疗倍受关注，EGFR基因是非小细胞肺癌患者治疗的重要靶点。通过EGFR基因突变检测，可以从肺癌患者中筛选出最合适的患者进行针对性治疗，从而显著提高药物疗效。但用于检测EGFR基因突变肿瘤组织获得难度较大，利用组织标本进行有效检测的几率仅为30%~40%，多种原因导致无法获得组织标本（如老人拒绝活检、晚期无法手术、 转院过来的化疗后进展、动态监测），部分病人因此错过TKI获益机会，部分病人在EGFR基因状态突变不明情况下服用TKI药物，部分无获益效果。

外周血标本采集无创、简便，检测的是循环肿瘤DNA（由凋亡或坏死肿瘤细胞裂解释放），其遗传性特性与肿瘤基因组相似，给无组织的晚期肺癌患者一次获益机会。2018年艾德生物的Super-ARMS EGFR检测试剂盒获批了之后，我们就从ARMS方法升级为Super-ARMS，灵敏度可达到0.2%，低拷贝模板的特异结合能力强，扩增效率高，更适合血液标本特性，使用荧光定量PCR技术，一天内完成实验，输出最终报告，这对于临床来说太及时了。

疫情下，血液诊断有什么优势吗？

徐教授：首先在时间上是有绝对优势的，组织检测虽然是金标准，但是从取样到病理科包埋评估，至少需要三个工作日，而血液检测只需一个工作日可出报告。

其次现在疫情期间要减少出门，尽量避免和别人接触，我们实验室设有专人接收并及时处理血液，当天的门诊病人可以在工作时间内抽血送检，另外如果当天在早上十点半之前来得及将血液送到实验室，下午四点左右就可以拿到检测报告，减少患者在外逗留的时间以及来医院的次数，对于患者来说可以减少交通、住宿和在医院感染肺炎的风险；对于医护人员来说，减少了和患者接触的次数，也减少了医院科室间人员的流动。

最后就是现在很多医院手术都尽可能减少，有部分患者使用血液初筛出阳性后，结合病理诊断结果可以直接吃上TKI药物，等疫情结束后再评估是否适合手术。

我们还开设了一个针对当地没有EGFR血液检测单位的检测服务项目，家属可以到我们实验室领取游离DNA专用采血管，该采血管可有效保护游离DNA长达7天，在当地医院采完患者血样后再送回实验室进行检测，报告还可以沟通一站式服务中心邮寄到家，方便了不便出外地就诊又有需要进行血液检测的患者。

另外从Super-ARMS EGFR这个试剂盒看，血液与组织的一致率达到了80%，是NMPA首次参照FDA伴随诊断试剂标准审批，经临床验证可指导EGFR靶向药物治疗，覆盖绝大多数EGFR突变类型，可满足临床检测需求。

对于临床采集血液和运输保存有什么要求和建议吗？

徐教授：因为ctDNA总量少、片段小、丰度低和半衰期短的特征，在取样-送检-保存过程中有一系列比组织更严格的条件：

1、患者要空腹或者餐后两小时采血，尽可能减少血脂对检测的影响；
2、一定要选用正确的采血管，必须要使用EDTA抗凝管或者游离DNA专用采血管；
3、采血要一次性抽取10ml全血，保证有4ml血浆进行提取，采血后要上下颠倒混匀；
4、送检要快，我们是规定两小时内必须送到实验室来进行血浆分离的，并且叮嘱配送人员在运输过程中不能剧烈震荡，设置专人随时接收标本进行及时分离；
5、有时候分离好的血浆当天不进行实验，我们就会放置在-20℃ 冻存直至DNA抽提。

对于游离DNA检测过程中需要注意哪些方面？

徐教授：主要是有以下几点：

1、试剂：要选用NMPA所审批通过的检测试剂盒，只有经过了临床试验等一系列考核的试剂盒才能更好地保障实验结果的准确性。
2、环境：要有严格的PCR实验室，配置使用方法所需仪器（如高速离心机，水浴锅，振荡器等等），核酸的提取一定要在生物安全柜中进行，且与组织样本的提取分开。
3、人员：需要经过系统培训并且有PCR上岗证的人员，严格按照实验室SOP操作。
4、质控保障：每次实验都要做上阴阳对照，监测环境、操作、试剂等是否有污染。

（血液检测所需仪器）

最后，我们从检验科林勇平主任处得知，分子诊断室老师们在此次疫情中，整个春节假期都在加班加点完成新型冠状病毒核酸检测实验室的组建，三个成员加入到全天24小时新冠检测工作中。其他成员顺利完成分子诊断室的整体搬迁，与转化实验室共同工作，并在大年初七如期照常开展原本实验室的所有分子检测项目。令小编肃然起敬，祝愿疫情早日退散，大地春暖花开。