作者：刘子豪

单位：天津医科大学肿瘤医院体检中心化验室 


基质效应


免疫测定的基质效应是指干扰抗原、抗体反应而与分析物本身无关的所有非特异性因素（即基质）对分析物反应的影响。


基质效应通常由蛋白质、电解质、补体、类风湿因子、抗人球蛋白抗体、药物、添加剂和各种污染物等引起[1]。


案例经过


查体人：男、54岁。一周前来本院检验科检测肿瘤标志物（12项），其中CA72-4结果为30.6↑（参考范围：0-6.9U/ml）。一周后来体检中心实验室复测，送检时查体人向实验室工作人员告知，一周前该项目结果升高。本中心工作人员随即对该项目进行检测，结果为4.42（参考范围：0-10U/ml），与上一次检验结果相差较大。


工作人员本着谨慎报告的原则，分析两次检测结果产生明显差异的原因。怀疑可能是由于样本中抗原浓度过高产生“钩状效应”，免疫反应被明显抑制，导致结果偏低；或者是异嗜性抗体影响引起的结果假性增高。随即对该标本进行稀释重测，以排除钩状效应及异嗜性抗体影响。


检测过程


  • 免疫实验仪器及方法学


实验室仪器：国产全自动分析仪，方法学：吖啶酯化学发光；检验科仪器：进口全自动免疫分析仪，方法学：电化学发光。


  • 检测结果


本室检验人员先用10倍稀释样本，结果为311.5↑，异常增高。笔者随即联系试剂厂家应用部门说明问题。


在与厂家应用部门沟通时发现，检验人员此次稀释所用的稀释液为产品升级前稀释液，不适用于升级后的产品，且样本所测结果本身不是特别高，稀释倍数可能过大，导致基质效应的产生，引起本室稀释前和10倍稀释后结果差异较大。


更换相应的稀释液后，且从低倍向高倍稀释后，结果在低倍稀释下与原测值基本一致，与检验科结果基本一致，见表1。


表1

1.png

表格中 - 为未做


笔者为进一步证实基质效应对免疫检测结果的影响做如下实验：1. 不同稀释倍数对免疫结果的影响；2. 不同的稀释液对免疫结果的影响。


  • 样本选取


各选取三个CA72-4阳性标本和阴性标本。


  • 方法


1. 通过改变不同的稀释倍数检测CA72-4所对应的结果，稀释倍数分别为：2倍、5倍、10倍、50倍、100倍。


2. 通过更换不同的稀释液检测CA72-4所对应的结果， 稀释液分别为：纯水、升级后稀释液（推荐稀释液）、升级前稀释液（不推荐稀释液）。


检测结果见表2、表3。


表2 阳性样本

2.png

R判断标准：80%-120%认为可接受


  • 结论


纯水和推荐稀释液稀释2倍后，R可接受；随着稀释倍数扩大，R不可接受。R不可接受的稀释后原始值均在15以下。厂家不推荐的稀释液验证数据显示，稀释后原始值均高于原始样本浓度水平，不能用于稀释临床血样。


表3 阴性样本

3.png

R判断标准：80%-120%认为可接受


  • 结论


阴性样本按照不同稀释液类型及不同梯度稀释，随着稀释倍数增加，R越大，均不可接受。其中不推荐稀释液R最大，不可用于稀释临床血样。


  • 结果分析


从以上实验结果可以看出：


1. 随着稀释倍数的增大，R值也随着增大，导致结果出现不可接受的情况；2. 当更换不同的稀释液以后，可以看出，厂家推荐使用的稀释液较纯水有一定的优势，优势在于做5倍、10倍、50倍、100倍稀释的时候，R值间相差更小，加大标本量时此结论可能更加明显；推荐使用的稀释液相较于不推荐的稀释液具有明显优势。


造成以上结果的原因是由于，使用的推荐稀释液中包含牛血清、离子稳定剂等成分，其成分能使稀释液更加接近人体血清的基质，相较于纯水和不推荐稀释液，可大大削减基质效应给实验带来的影响。


R=（稀释后结果-稀释前结果）÷稀释前结果×100%（本实验室所用厂家试剂R值范围为：80%-120%）。


心得体会


在日常工作中，检验人员对测值应该更加敏感、更加耐心。当出现异常结果时，需通过多种途径排除干扰，尽可能的降低外在因素对检验结果的影响，从而给出正确的结果。


当存在钩状效应、异嗜性抗体、样本浓度过高等因素影响时，应当采取相应手段予以纠正结果。需要稀释的样本，还应当注意基质效应对检测结果的影响，需从低浓度向高浓度梯度稀释，直到R值在厂家所给定的合适范围内为止。


不同厂家所研发的免疫项目，理论上都应该存在相应的R值的范围，该范围是根据各厂家内部大量的实验数据所得，目的是进一步验证稀释后结果的有效性。检验人员应当对这一“隐藏参考范围”充分了解。其次，如厂家有推荐使用的样本稀释液，应该优先使用。通过上述方法，可以极大程度降低基质效应对结果的影响，更准确的判断结果的真实性。


总之，影响免疫检测的因素很多，要达到检测的标准化和规范化以及各实验室间结果的可比性还有大量的工作要做。全面了解和掌握免疫检测的特点，合理科学的严格执行操作规程，避免分析前、分析中、分析后等不良因素对检测结果的影响，使免疫检测在对应的疾病诊断与防治中发挥更重要的作用。


特别鸣谢：苏州长光华医生物医学工程有限公司技术应用部钱庆芳经理给予的技术支持。


【参考文献】

[1]吴建民.影响肿瘤标志物检测的因素[J].中华检验医学杂志摘,2005(4):352-354. 

[2]王玉兰 李刚 王远忠 高娟娟 刘振波 宗春辉 郭廷 付汝坤 倍比稀释法在医学实验室室间质量评价活动中应用研究中国国境卫生检疫杂志,2014,(5):321-324.