Ct值，其完整名称为CycleThresholdValue，中文翻译为循环数阈值。在新冠病毒核酸检测中，Ct值越小，代表病毒浓度越高；Ct值越大，则表示病毒浓度越低。


在核酸检测过程中，影响Ct值的因素众多，下面就按照医学检验实验室检验前、检验中和检验后的三个阶段，简要探讨一下影响因素。


一、检验前阶段


1.患者准备


在采集鼻咽拭子之前，未先去除鼻腔中的多余分泌物；或在进食之后未漱口就立刻采集口咽拭子，粘液和食物残渣均有可能抑制PCR反应，导致Ct值结果不准确。


2.标本采集时间


受检者在感染初期就采集标本；无防护措施直接暴露在病毒污染的环境中；与确诊病例/无症状感染者密切接触的1-2天内；在恢复期采集标本，例如已经发生症状超过7天，这些情况会影响结果。


3.标本采集手法


标本采集人员手法不熟练，未采到或者采集量很少，Ct值就会出现偏差。


4.生物差异


同一个体的左右鼻孔在一天中的不同时间段；不同年龄段会影响结果。


5.标本保存介质


不同品牌、不同批次的采样管中的保存液均有一定的差异，这些差异也会对结果产生干扰；


6.标本类型


即使是同一个体，不同的标本类型，例如鼻咽拭子、口咽拭子及粪便，也会得到不同的Ct值结果。


7.运输和储存环节


样本在转运过程中的运输条件、温度等也会影响结果的准确性。


8.标本的稳定性


标本采集之后如果无法立即进行检测，随着时间的推移，病毒核酸会发生一定程度地降解，从而也会对Ct值产生影响。


二、检验中阶段


9.核酸提取效率


不同品牌的提取试剂盒、提取仪采用的原理并不一致，提取效率也有差别，会对最终结果造成影响。


10.试剂盒设计靶点


Ct值可能因不同品牌试剂盒针对病毒基因靶点的不同，而在扩增效率上出现差别，导致同一或不同标本的结果差异较大。


11.病毒变异的影响


一般来说，PCR引物设计时会选取病毒序列保守且特异性高的区域，但引物/探针的结合仍可能会受到病毒变异的干扰，从而导致Ct值发生变化。


12.阈值


结果判读过程中，使用软件自动设置阈值线和手动设置阈值线，会得到不同的Ct值，甚至可能出现截然不同的结果。

13.质控品


试剂盒中自带的阳性质控品，一般均无法溯源，这就给确认结果的准确性带来了挑战。

14.检出限差异

不同品牌的检测试剂有不同的检测下限，结果无法跨平台标准化。

15.Ct值报告范围

一般来说，试剂盒都明确规定了判定为阳性的Ct值范围，而不宜报告处于灰区之中的数值。

16.试剂批间差

使用新批次试剂与旧批次同时检测同一阳性样本，Ct值也会存在差异。

17.人员操作

同一样本的Ct值会因操作人员不同、甚至一天中的不同操作时间而出现较大差异，特别是采用手工方法时。


三、检验后阶段

Ct值结果报告目前服务于不同的检测目的，如筛查、监测、诊断、出院标准、传染性等，对Ct值的解释和使用也不尽相同。

18.筛查与出院标准

方舱医院的出院标准为Ct值两次≥35且中间间隔24小时，而筛查时检测实验室判定阳性的标准为Ct值≤40；


19.监测

对于同一患者进行病情变化的监测，应当使用同一套检测系统，此时报告Ct值才有一定的参考价值。


20.诊断与传染性


核酸检测阳性可作为诊断无症状感染者或确诊病例的依据之一。但阳性不等于具有传染性，出舱康复患者“复阳”就是一个例子。导致阳性的可能仅仅是一些病毒RNA片段，样本中未能分离出活病毒，相关密切接触者也未出现被感染的情况。


21.被检测者的因素


免疫和/或接种疫苗情况可能会影响Ct值的效用。若受到病毒不同变异株的继发性感染，Ct值的解释尚不清楚。


22.可报告单位


例如实验室中常见的Ct值、ng/μL（纳克/微升），与报告单上的检出限copies/mL（基因组拷贝数/毫升）等之间缺乏相关性，若报告Ct值可能使结果解释复杂化。


可以明确的是，新冠病毒核酸检测中所涉及的实时荧光PCR法仍然是按照定性要求建立的方法。


与新冠病毒核酸检测不同，乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）核酸检测中，同样是实时荧光PCR，但方法学的建立和验证都是参照定量方法的参数，具有标准品、标准曲线，最终报告的也是具体浓度数值，该数值也可以溯源至国家标准。对于新冠病毒核酸检测，目前尚不具备按照定量方法要求的前提条件。