作者:王东红 李鹏 冯剑南

审校:纪爱芳

单位:长治医学院附属和平医院

  

案例分析

  

我们在做血细胞分析时肯定会遇到这样的问题,散点图有效粒子数稀少,看技术参数914,VCS的标准是7500+,那这个结果准确吗?(图1)


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图1


先回顾下VCS技术,就是运用电阻抗、电导、散射光三种探针在流式通道中对白细胞逐个、同时、三重的检测形成三维散点图以确定其亚群的性质。


软件根据特定原理识别白细胞亚群,使光电信号转换为数字信号,每一个样本总共计数8192个粒子数(图2),就会停止计数,进入分析环节。


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图2


随机某个样本为例(图2),软件分析7917,比8192少,主要去除一些非细胞光学特征的颗粒的影响(尘埃、杂质)。最后显示到散点图上的才是有效粒子数7907,主要去除破坏的白细胞、难溶红细胞的干扰。


这里要注意,每个样本总粒子数8192是恒定的,分析粒子数和有效粒子数都不一样,因为每个样本的环境不一样,化学平衡过程也是不一样的。理论上保障有效粒子数达到7500+,结果比较可靠,如果很多样本有效粒子数小于7500,怎么解决----化学平衡(Conductivity Matching)。


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定义:样本与2种溶血素反应后在白细胞形态学上达到的平衡状态,这个过程是在混匀池中进行。(图3)


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图3


酸性溶血剂(E-Lyse)与样本同时进入混匀池,酸性溶血剂的渗透压较小,使细胞膨胀,因为红细胞膜上胆固醇成分比白细胞多,所以红细胞先膨胀破裂,白细胞只是膨胀但未破裂;碱性溶血剂(S-Lyse)的渗透压比较大,补偿了样本中未破裂白细胞的渗透压,当白细胞内外的离子浓度平衡时,细胞停止皱缩,准备进流动池进行分析。


这个过程叫做化学平衡,其结局是通过流动池的粒子只能是WBC,而且要接近于人体自然状态的WBC


所以影响化学平衡最关键的个因素:样本和2种溶血素。

 





   

了解这个过程,我们开始做化学平衡,宗旨:调节样本与2个溶血剂的比例使化学再平衡。


首先第一个要素是选择样本,它必须具备一定的条件:正常的青中年人的新鲜血,而且受试者必须健康,不能有基础疾病,无不良嗜好,血细胞计数项目必须在正常的参考范围。


样本吸样量固定34ul,酸性溶血剂的量也是固定的548ul,所以我们唯一可以调节的是碱性溶血剂的量,设定起始量(图4),比如230ul,按梯度逐渐增量3ul,第一列碱性溶血剂(diff preservative volume)的量230-233-257,设定尽量大的浓度梯度。第二列有效粒子数(goodcount),随着碱性溶血剂的量逐渐增大,有效粒子数也随之增多,之后又开始减少,原因是碱性溶血剂过量后,使细胞微环境又中性变为碱性,导致白细胞大量破裂,有效粒子数逐渐


所以我们要做的是找到最佳的平衡点(图5),横坐标碱性溶血剂的量,纵坐标有效粒子数,最后确定247ul作为本次平衡的终点。


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这个过程就是化学平衡,同样也解决了现实中存在的一个问题:分类包2种溶血剂使用不均衡,一瓶还有剩余,另一瓶已空,所以说好的化学平衡不仅可以使结果更准确,降低样本重测率,缩短TAT,也可以节约试剂降低耗占比。






 

再回头看看上面的案例(图6),化学平衡前,有效粒子数很少只有914,平衡后7659。


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图6


再看结果的影响(图7),淋巴和嗜碱变化比较大。


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图7


案例总结


临床上遇见此类的案例,如果是偶然一次,重新检测即可解决,因为化学平衡影响因素很多:环境温度、湿度、 大气压、混匀池的混匀速率、34ul的样本进入混匀池的速率、样本问题等等,如果高概率重复出现,则必须做化学平衡。